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内参cq值一般多少合适（内参gapdhct值多大比较好）

发布时间：2023-04-22 07:29:17 稿源：创意岭阅读： 105

大家好！今天让创意岭的小编来大家介绍下关于内参cq值一般多少合适的问题，以下是小编对此问题的归纳整理，让我们一起来看看吧。

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本文目录:

1、qRT-PCR检测植物miRNA的表达量，内参基因选择什么最好？可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗？
2、荧光PCR时ct值大于30？
3、小鼠14-3-3 zeta的内参基因选什么
4、cq值高应该降低模版浓度吗

内参cq值一般多少合适（内参gapdhct值多大比较好）

一、qRT-PCR检测植物miRNA的表达量，内参基因选择什么最好？可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗？

我知道和使用过的U6内参基因只有两个： RNU6-1和RNU6-2.前一个就是常见的u6，后一个有时被称为u6b. 在我的大鼠RNA样本当中，u6表达量有些太高，u6b的Cq值与我的目标miRNA比较接近，稳定性也很好。但是这些对植物样本中的内参基因选择没有什么指导意义。

为了确定u6在植物中的保守性，比较快捷的办法是找到谈论这个话题的文献综述。如果没有人写过这样的综述的话，就只能靠自己去数据库找到所有序列自己对比了。

关于内参基因的选择，必须实验确定特定样本中的表达水平稳定，其他文献中报导的内参基因不一定适合你的样本。做新的课题时，选择内参基因一般是选取3-5个常用的，PCR测试后选取。

这里有applied biosystem一篇非常好的文章讨论内参基因，里面有很多建议和备选，但都是人和小鼠中测试的。我贴链接不方便，麻烦你自己把点和斜换成标点以后使用：

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以上公司的miR PCR是茎环法，也是我使用过的，两个引物不在同一个管内，两个步骤也是完全分开先后进行的。暂时没有看到他们有内参和目标基因在同一反应管进行的miR PCR产品，因为他们的PCR探针都用的同一种荧光。如果楼主感兴趣RT-PCR一步反应的，并且内参能够与目标miR在同一反应体系进行的产品，还要去咨询各大厂商。

二、荧光PCR时ct值大于30？

看了你空间里的溶解曲线，你可以看到溶解峰的温度都很低，全在80以下，你扩出来的东西多半只是引物，你跑定量的时候有做NTC的孔吗，如果有做，可以对照NTC组和加了模板的组，溶解峰还是一样的话，那你扩出来的产物100%是引物了。

再有，你的扩增曲线问题，CT太了，一般做定量认为CT=25时，是一个模板扩出来的，所以当大于25扩出来的结果都不可信。

还有，你反转录的时候RNA加多少，2微克？，反转录体系是多少,20微升？反转录之后按照多少比例稀释，1比4？

总之，问题可以再问详细一点，也可以直接HI我

如果做过NTC那溶解峰就没问题了，而且都很单一，特异性蛮好的。没稀释的cDNA做的定量，CT大于30？你P的什么基因呢，表达量也太低了吧，内参的CT呢，也是这么低吗

三、小鼠14-3-3 zeta的内参基因选什么

我知道和使用过的U6内参基因只有两个：RNU6-1和RNU6-2.前一个就是常见的u6,后一个有时被称为u6b.在我的大鼠RNA样本当中,u6表达量有些太高,u6b的Cq值与我的目标miRNA比较接近,稳定性也很好.但是这些对植物样本中的内参基因选择没有什么指导意义.

为了确定u6在植物中的保守性,比较快捷的办法是找到谈论这个话题的文献综述.如果没有人写过这样的综述的话,就只能靠自己去数据库找到所有序列自己对比了.

关于内参基因的选择,必须实验确定特定样本中的表达水平稳定,其他文献中报导的内参基因不一定适合你的样本.做新的课题时,选择内参基因一般是选取3-5个常用的,PCR测试后选取.

这里有applied biosystem一篇非常好的文章讨论内参基因,里面有很多建议和备选,但都是人和小鼠中测试的.我贴链接不方便,麻烦你自己把点和斜换成标点以后使用：

www3点appliedbiosystems点com斜cms斜groups斜mcb_marketing斜documents斜generaldocuments斜cms_044972点pdf

以上公司的miR PCR是茎环法,也是我使用过的,两个引物不在同一个管内,两个步骤也是完全分开先后进行的.暂时没有看到他们有内参和目标基因在同一反应管进行的miR PCR产品,因为他们的PCR探针都用的同一种荧光.如果楼主感兴趣RT-PCR一步反应的,并且内参能够与目标miR在同一反应体系进行的产品,还要去咨询各大厂商.

如果你对这个答案有什么疑问，请追问，

另外如果你觉得我的回答对你有所帮助，请千万别忘记采纳哟！

四、cq值高应该降低模版浓度吗

应该的，cq值高应该降低模版浓度的，因为cq值高降低模版浓度是正常的，也是必须的，所以cq值高应该降低模版浓度

以上就是关于内参cq值一般多少合适相关问题的回答。希望能帮到你，如有更多相关问题，您也可以联系我们的客服进行咨询，客服也会为您讲解更多精彩的知识和内容。