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内参actin（内参actin和gapdh）
发布时间：2023-04-19 04:33:11
稿源：
创意岭 阅读：
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大家好！今天让创意岭的小编来大家介绍下关于内参actin的问题，以下是小编对此问题的归纳整理，让我们一起来看看吧。
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本文目录:
一、western blot内参抗体actin为什么出了好几条带
首先要确定你的样品没有降解，基本上看带型可以确定，条带要干净，没有拖尾，其次是你的一抗，这个需要跟别个同学做的对比，这两个问题排除后主要就是你的抗体稀释度了，浓度过高，显影底物过强都会出现杂带，而杂带跟你每次操作包括洗脱的时间 孵育的时间的不同，都可能出现在不同的位置
二、RT-PCR是，内参是什么时候加入，作用是什么？谢谢
你说的应该是real
time
pcr吧，注意rt其实是逆转录reverse
transcription的缩写，和real
time一定要分开来。
常说的qpcr，qrt-pcr，都是通过实时（real
time）的方法，测定样品中某个模版的起始量ct值
但是呢，由于之前rna提取、反转等步骤，各个步骤存在不同的效率，ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量，因此，需要一个内参来做为参考。
比方说，a基因的ct值，在a样品中是18，在b样品中是20，由于a
b样品存在rna质量等等一系列不同，你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。
这时候，我们需要一个内参，假如内参ct值在a样品中是14，而在b样品中是15。由于内参的稳定性，在不同样品中被认为是表达量一致的，因此，a基因的在ab样品之间的-δδct值是1，也就是表达量为2倍的关系。
这里，我们可以知道内参的作用，即通过测量内参，可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因，这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例，常用的内参有actin
gapdh
hprt等等。
当然，现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同，例如gapdh，在线粒体含量高的组织中丰度高，很多人认为用基因组dna做内参会更加靠谱，当然这是后话了，选择gapdh无碍于现阶段的实验，如果觉得不靠谱，可以选择两个内参。
你所研究的物种，应该有人已经发表过相应的内参，直接上数据库搜就可以了。
原创内容，码字不易，万望采纳。
三、求助水稻的actin 内参基因引物
ACTIN在研究中被发现最不稳定 引物为：
Forward GAAGATCACTGCCTTGCTCC
Reverse CGATAACAGCTCCTCTTGGC
其他较好的水稻内参基因为：
18S rRNA
Forward ATGATAACTCGACGGATCGC
Reverse CTTGGATGTGGTAGCCGTTT
Glyceraldehyde-3-hosphate dehydrogenase
Forward GGGCTGCTAGCTTCAACATC
Reverse TTGATTGCAGCCTTGATCTG
Tubulin
Forward TACCGTGCCCTTACTGTTCC
Reverse CGGTGGAATGTCACAGACAC
出自一下文章：
《Normalization of reverse transcription quantitative-PCR with
housekeeping genes in rice》
你可以上网下载自己好好研究下
内参基因对于实时定量的结果非常重要 要慎重选择
四、请问内参β-actin在血细胞里面也有表达吗？特别是红细胞，里面有吗？
都表达，他们的基因都是组成型基因，每种组织都会表达。所以红细胞里面也有。
以上就是关于内参actin相关问题的回答。希望能帮到你，如有更多相关问题，您也可以联系我们的客服进行咨询，客服也会为您讲解更多精彩的知识和内容。
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