shRNA设计（shRNA设计原则）

大家好！今天让创意岭的小编来大家介绍下关于shRNA设计的问题，以下是小编对此问题的归纳整理，让我们一起来看看吧。

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本文目录:

• 1、求助：shRNA设计的步骤及软件

• 2、如何设计连接到质粒载体上的shRNA序列，查的文献序列看不明白

• 3、shrna敲低原理

• 4、筛选的sirna可以直接用于设计shrna吗

一、求助：shRNA设计的步骤及软件

软件很多，网上一搜便知，至于Blast，可以将你设计的靶点直接输入进行Blast，同源性越低越好

二、如何设计连接到质粒载体上的shRNA序列，查的文献序列看不明白

应该不是输入错误。GATCC是故意设计的，这样正确连接上shRNA的质粒就不会被BalII切断，可以以此来验证shRNA有没有被连接上（自连的质粒会被BglII切断成linear的通过跑胶就能看出区别

三、shrna敲低原理

siRNA序列是与mRNA目的序列完全互补结合的，所以是降解；当不完全互补时才是抑制翻译，miRNA大部分是这样的。

从而在1oxP 动物的一定发育阶段和一定组织细胞中实现对特定基因进行遗传修饰之目的的基因敲除技术。

人们可以通过对诱导剂给予时间的预先设计的方式来对动物基因突变的时空特异性进行人为控制、以避免出现死胎或动物出生后不久即死亡的现象。常见的几种诱导性类型如下：四环素诱导型；干扰素诱导型；激素诱导型；腺病毒介导型。

原理方法：

1、利用基因同源重组进行基因敲除基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。

1985年，首次证实的哺乳动物细胞中同源重组的存在奠定了基因敲除的理论基础。到1987年，Thompsson首次建立了完整的ES细胞基因敲除的小鼠模型。直到现在，运用基因同源重组进行基因敲除依然是构建基因敲除动物模型中最普遍的使用方法。

2、诱导性基因敲除也是以Cre/loxp 系统为基础，但却是利用控制Cre 表达的启动子的活性或所表达的Cre 酶活性具有可诱导的特点，通过对诱导剂给予时间的控制或利用Cre 基因定位表达系统中载体的宿主细胞特异性和将该表达系统转移到动物体内的过程在时间上的可控性。

四、筛选的sirna可以直接用于设计shrna吗

siRNA 基因沉默子进入培养细胞，可快速有效地短暂地降低靶基因的表达。使用嘌呤酶素选择 shRNA 或 shRNA 慢病毒颗粒是一种达到稳定基因沉默的方法。因此，如果一个靶基因的蛋白转换较慢，shRNA 质粒或 shRNA 慢病毒颗粒应该是达到同样效果的理想...

以上就是关于shRNA设计相关问题的回答。希望能帮到你，如有更多相关问题，您也可以联系我们的客服进行咨询，客服也会为您讲解更多精彩的知识和内容。

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