GPT活性升高是反映蛋白质

大家好！今天让创意岭的小编来大家介绍下关于GPT活性升高是反映蛋白质的问题，以下是小编对此问题的归纳整理，让我们一起来看看吧。

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本文目录:

• 1、人体内氨基酸的分解代谢终产物是什么？

• 2、如何看懂肝功化验单

• 3、GOT比GPT高

• 4、丙氨酸氨基转移酶

一、人体内氨基酸的分解代谢终产物是什么？

人体内

氨基酸的代谢是比较复杂的过程，而且是个动态过程，但当人体机能全部消失后最终会通过各种方式转化为二氧化碳、水以及能量。

二、如何看懂肝功化验单

问题一：怎么看肝功能化验单 主要指标编辑

一、

肝功能化验单[1]

谷丙转氨酶（ALT）：0～40μ/L

二、谷草转氨酶（AST）：0～40μ/L

三、碱性磷酸酶（ALP）：30-90u/L

四、谷氨酰转移酶（GGT）：小于40单位

五、总蛋白（TP）：60-80克/L；白蛋白（A）：40-55克/L；球蛋白（G）：20-30克/L；白蛋白（A）/球蛋白（G）：1.5-2.5：1

六、总胆红素：1.71－17.1μmol/L(1－10mg/L)；间接胆红素1.7-13.7μmol/L；直接胆红素：1.71－7μmol/L(1－4mg/L)

七、甲胎蛋白(AFP)：

主要在胎儿肝中合成，分子量6.9万，在胎儿13周AFP占血浆蛋白总量的1/3。在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右，约40mg/L，在周岁时接近成人水平（低于30μmg/L）[2]。

2化验说明编辑

肝功能检查是通过各种生化实验方法监测与肝脏功能代谢有关的各项指标，以反映肝脏的功能基本状况。不肝功能化验单是对肝功能化验结果的显示，医生通过对肝功能化验单的查看，可以很好的判断出一个人肝脏的情况，如果出现病变的话，医生可以根据患者的检查结果得出相应的结论。以此作为参考的依据。对于不同的医院来说，其肝功能化验单的所显示的结果的参考值可能会存在这差别，这是由不同的医院自行决定的。

在肝功能的化验单中显示了包括对转氨酶，像谷丙转氨酶、谷草转氨酶，白蛋白，球蛋白，白球比值，胆红素，胆汁酸等多项检查结果的显示。每一项检查结果显示的内容所代表的意思不尽相同，通过对肝功能化验单所显示的分析，再和参考值结果对比分析，可以判断出一个人的肝脏是否出现了问题，或者是问题的严重程度，不过很多人看不懂肝功能化验单，因此说学会看肝功能化验单[3]很重要。

3基本项目编辑

(1)反映肝实质损害的指标

主要包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等，其中ALT是最常用的敏感指标，1%的肝细胞发生坏死时，血清ALT水平即可升高1倍。AST持续升高，数值超过ALT往往提示肝实质损害严重，是慢性化程度加重的标志。

(2)反映胆红素代谢及胆汁淤积的指标

主要包括总胆红素(TBil)、直间接胆红素、尿胆红素、尿胆原、血胆汁酸(TBA)、γ―谷氨酰转肽酶(γ―GT)及碱性磷酸酶(ALP)等。肝细胞变性坏死，胆红素代谢障碍或者肝内胆汁淤积时，可以出现上述指标升高。溶血性黄疸时，可以出现间接胆红素升高。

(3)反映肝脏合成功能的指标

主要包括白蛋白、前白蛋白、胆碱脂酶及凝血酶原时间和活动度等，长期白蛋白、胆碱脂酶降低，凝血酶原活动度下降，补充维生素K不能纠正时，说明正常肝细胞逐渐减少，肝细胞合成蛋白、凝血因子功能差，肝脏储备功能减退，预后不良。

(4)反映肝纤维化的指标

主要包括Ⅲ型前胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(C―Ⅳ)、透明质酸(HA)、层连蛋白(LN)等，这些指标可以协助诊断肝纤维化和早期肝硬化。

(5)肝脏凝血功能的检测指标

肝脏能合成Ⅲ及因子a链以外的全部凝血因子，在维持正常凝血机能中起重要作用。肝病患者的凝血因子合成均减少，临床可出现牙龈、鼻黏膜出血，皮肤淤斑，严重者可出现消化道出血。一般，最早出现、减少最多的因子Ⅶ，其次是因子Ⅱ和Ⅹ，最后出现，减少最少的是因子Ⅴ。

A、凝血酶原时间（PT）

正常值为11～15秒，较正常对照延长3秒以上有意义。急性肝炎及轻型慢......>>

问题二：肝功能化验单如何看 很多人拿到肝功能化验单之后并不知道那些指标都代表这什么，今天民众体检中心的专家就来给大家讲解一下，以及肝功能化验单上的一些指标的含义。由于每家医院的实验室条件、操作人员、检测方法的不同，因此不同医院提供的肝功能检验正常值参考范围一般也不相同。在这里我们不再罗列每个项目的正常值参考范围，只就每个项目的中文名称、英文代码及有何主要临床意义作一介绍。：在肝功能化验单上反映肝细胞损伤的项目以血清酶检测常用，包括丙氨酸氨基转移酶(俗称谷丙转氨酶AL T)、门冬氨酸氨基转移酶(俗称谷草转氨酶AST )、碱性磷酸酶(AL P)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT或GGT )等。在各种酶试验中，ALT 和AST 能敏感地反映肝细胞损伤与否及损伤程度。各种急性病毒性肝炎、药物或酒精引起急性肝细胞损伤时，血清ALT 最敏感，在临床症状如黄疸出现之前ALT 就急剧升高，同时AST 也升高，但是AST 升高程度不如ALT.而在慢性肝炎和肝硬化时，AST 升高程度超过ALT ，因此AST 主要反映的是肝脏损伤程度。在重症肝炎时，由于大量肝细胞坏死，肝功能化验会出现，血中ALT 逐渐下降，而此时胆红素却进行性升高，即出现“胆酶分离”现象，这常常是肝坏死的前兆。在急性肝炎恢复期，如果出现ALT 正常而γ-GT持续升高，常常提示肝炎慢性化。患慢性肝炎时如果肝功能化验单上γ-GT持续超过正常参考值，提示慢性肝炎处于活动期。在肝功能化验单上，反映肝脏分泌和排泄功能的项目包括总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、总胆汁酸(TBA )等的测定。当患有病毒性肝炎、药物或酒精引起的中毒性肝炎、溶血性黄疸、恶性贫血、阵发性血红蛋白尿症及新生儿黄疸、内出血等时，都可以出现总胆红素升高。直接胆红素是指经过肝脏处理后，总胆红素中与葡萄糖醛酸基结合的部分。直接胆红素升高说明肝细胞处理胆红素后的排出发生障碍，即发生胆道梗阻。如果同时测定TBil和DBil，可以鉴别诊断溶血性、肝细胞性和梗阻性黄疸。溶血性黄疸：一般TB il 35%;阻塞性黄疸：一般TBil>340 μmol /L ，直接胆红素/总胆红素>60%。另外γ-GT、ALP 、5 '-核苷酸(5 '-NT)也是很敏感的反映胆汁淤积的酶类，它们的升高主要提示可能出现了胆道阻塞方面的疾病。在肝功能化验单上，反映肝脏合成贮备功能的项目包括前白蛋白(PA)、白蛋白(Alb )、胆碱酯酶(CHE )和凝血酶原时间(PT)等。它们是通过检测肝脏合成功能来反映其贮备能力的常规试验。前白蛋白、白蛋白下降提示肝脏合成蛋白质的能力减弱。当患各种肝病时，病情越重，血清胆碱酯酶活性越低。如果胆碱酯酶活性持续降低且无回升迹象，多提示预后不良。肝胆疾病时ALT 和GGT 均升高，如果同时CHE 降低者为肝脏疾患，而正常者多为胆道疾病。另外CHE 增高可见于甲亢、糖尿病、肾病综合征及脂肪肝。凝血酶原时间(PT)延长揭示肝脏合成各种凝血因子的能力降低。在肝功能化验单上，反映肝脏纤维化和肝硬化的项目包括白蛋白(Alb )、总胆红素(TBil)、单胺氧化酶(MAO )、血清蛋白电泳等。当病人患有肝脏纤维化或肝硬化时，会出现血清白蛋白和总胆红素降低，同时伴有单胺氧化酶升高。血清蛋白电泳中γ球蛋白增高的程度可评价慢性肝病的演变和预后，提示枯否氏细胞功能减退......>>

问题三：如何看懂肝功能化验单呢? 临床上肝功能检查的主要项目包括:蛋白代谢检查.糖代谢检查.脂类检查.胆红素代谢检查.血清酶学检查等.常见以下几种酶:谷丙转氨酶(英文简写为ALT或GPT).谷草转氨酶(AST或GOT).碱性磷酸酶(英文简写为ALP).γ-氨酰转肽酶(英文简写为γ-GT).胆碱酯酶(英文简写为CHE).它们的正常值一般在化验单上标示出来.如果采取的化验方法不同.各种酶的值也就不同.通常的参考值是:ALT>

问题四：肝功能报告表怎么看 鉴于大家都不看不明白肝功能化验单，因此我们做了下面的肝功能化验单对照表，里面包含了肝功能检查项目、肝功能指标的正常值、肝功能指标的意义等。

项目 缩写 正常值 肝功能检查项目的意义(偏高的意义)

谷丙转氨酶 ALT 0~40 谷丙转氨酶偏高可能是肝脏受到损害造成的，如患慢性肝炎、肝硬化肝癌等。

谷草转氨酶 AST 0~40 肝功能检查中谷草转氨酶升高意味着肝脏损害严重。

谷草/谷丙 AST/ALT 0.80~1.5 谷草/谷丙比值偏高说明肝存在实质的损害

谷氨酰转移酶 GGP 7~32 当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中GGT增高。

碱性磷酸酶 ALP 53~128 常见于骨病、肝病

总胆红素 TBILI 5.1~19.0 肝脏发生炎症、坏死、中毒等损害时均可以引起胆红素偏高

直接胆红素 DBILI 0.0~5.1 肝内及肝外阻塞性黄疸，胰头癌，毛细胆管型肝炎及其他胆汁瘀滞综合征等。

间接胆红素 IBILI 5.0~12.0 衰老红细胞被破坏后产生出来的血红蛋白衍化而成

总蛋白 TP 60~80 主要是血清中水分减少，使总蛋白浓度相对增高，如呕吐、大量出汗

白蛋白 ALB 35~55 主要由于血液浓缩而致相对性增高，如严重脱水和休克。

球蛋白

GLB 15.0~35.0 球蛋白是机体免疫器官制造的, 当体内存在病毒等抗原（敌人）时,球蛋白就会升高。

白球比 ALB/GLB 1.00~2.00 白球比值偏低、倒置，可能有慢性肝实质性损害，预后较差

总胆固醇 CHOL 3.35~6.45 见于高脂血症、动脉粥样硬化、糖尿病、肾病综合征、胆总管阻塞、高血压等。

甘油三酯 TRIG 0.48~1.17 甲状腺功能亢进，肾上腺皮质机能减退，肝功能严重低下。

尿酸 UA 202~416 常见于痛风、白血病、恶心肿瘤等。

问题五：肝功能化验单怎么看 很多人都不知道，实际上解读一张肝功能化验单并没有想象中的那样困难。下面就请肝病专家教大家，让大家更加深刻的理解肝功能化验单上各个指标都有什么含义。肝功能生化学指标中的转氨酶、胆红素、球蛋白的水平在检查时如果数值越高，说明肝脏的病情越重，而有肝脏合成的白蛋白指标检查结果越低，说明肝脏受损程度越深。患者只要结合个人实际的检查数值和医院的正常值对比就可获知自己的每个指标是高还是低。推荐阅读》》》肝功能检查注意事项 肝功能五项指标一般的，在肝功能生化学指标检查后，如果确定了肝功能异常，还要进行乙肝五项病毒指标的检查，通过hbsag（表面抗原）、hbsab（表面抗体）、h罚eag（e抗原）、hbeab（e抗体）、hbcab（核心抗体）的检查，了解是否是因为感染了乙肝病毒导致，同过这五项的检查再结合hbvdna的定量分析，就可以了解病毒数量，结合转氨酶的变化，就可以确定最佳的治疗时机。当然除了自己要了解以外，找一家正规专科医院治疗是非常关键的。在这里为大家推荐国内最好的肝病医院--北京肝病医院，该院拥有国内先进的肝病诊疗设备，其中高速螺旋CT、核磁共振、乙肝病毒HBV基因检测系统、肝脏B超等一批高精端医疗设备达国内一流水平，这为精确诊断提供了最科学的依据。

问题六：如何看肝功化验单 很多朋友不知道肝功能化验单怎么看,所以有很多贻误病情的例子.所以,我们要学会自己分析肝功能化验单,检查自己是否感染病毒.

肝功能化验单之胆红素定量试验：

用这种试验了解病人有无黄疸及黄疸的深浅情况.胆红素的正常值是100毫升的血清含量不超过1毫克.含量超过1毫克的为异常,表明有黄疸；胆红素含量越高,表明黄疸程度越深.

肝功能化验单之麝香草酚浊度试验（也称T.T.T）：

用这种试验了解肝细胞损害的程度,正常数值为0－6单位；如果超出6单位为不正常.还有一种类似的试验方法是硫酸锌浊度试验,正常值为12单位以下.

肝功能化验单之丙氨酸转氨酶活性试验（ALT)

旧称谷一丙转氨酶活性试验（也称GPT）；肝细胞里含有很多丙氨酸转氨酶,当肝细胞受到损害时,这种酶就会从肝细胞里释放出来,进入血液里,使血液里的丙氨酸转氨酶浓度增高.ALT正常范围是赖氏比色法：

问题七：如何看肝功能化验单 10分 您好！

1、你是乙肝大三阳，谷丙转氨酶42稍高2个，你的HBV―DNA 4.03乘以十的供次方，病毒量403000000，病毒处于复制中，最好进行抗病毒治疗，服用贺普丁，1片/次/日，至少连服1年，三个月或者半年检测一次B超、肝功和HBV-DNA，如果病毒停止复制，转氨酶自然复原；

2、如乙肝病毒不再复制，贺普丁减量服用，但不可马上停药，防止乙肝病毒反弹，直至贺普丁减量至最小量方可停服，如果肝功检验正常，HBV-DNA检验呈阴性，且有抗病毒治疗一年以上，可以循序渐进地停止抗病毒治疗，与乙肝病毒和平共处；

3、饮食上多食用菌类食品，如木耳、香菇、蘑菇等，能提高免疫力，鱼类含有丰富的蛋白质且易消化，多吃新鲜蔬菜和水果，增加VC含量，不吸烟、不饮酒，减少肝脏负担，少食用和不食用油炸、腌制、油腻太大、辛辣带有 *** 性的食品，以清淡饮食为宜。

问题八：肝功能化验单和乙肝化验单怎么看？ 诊断：病毒性肝炎（乙型），提示“大三阳”，具有较强传染性。

但目前肝功能（ALT、AST）未见明显异常，未进入失代偿期，比较理想。

积极治疗乙型肝炎病毒，同时加强护肝，定期复查肝功能。

三、GOT比GPT高

【 原 理 】

转氨酶是体内重要的一类酶.转氨酶催化α–氨基酸的α–氨基与α–酮酸的α–酮基之间的相互转化,从而生成一种新的氨基酸与一种新的酮酸,这种作用称为转氨基作用.它在生物体内蛋白质的合成,分解等中间代谢过程中,在糖,脂及蛋白质三大物质代谢的相互联系,相互制约及相互转变上都起着很重要的作用.

在动物机体中活力最强,分布最广的转氨酶有两种:一种为谷氨酸草酰乙酸转氨酶(glutamic-Oxaloacetate transaminase简称GOT),另一种为谷氨酸丙酮酸转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase简称GPT).本实验以谷氨酸丙酮酸转氨酶为例.它的催化反应如下:

GPT

丙氨酸 + α–酮戊二酸 谷氨酸 + 丙酮酸

37℃

由上可见此反应最终产物是丙酮酸.测定单位时间内丙酮酸的产量即可得知转氨酶的活性.

丙酮酸可与2,4–二硝基苯肼反应,形成丙酮酸二硝基苯腙,在碱性溶液中呈棕红色,显色的深浅在一定范围内可反映所生成的丙酮酸量多少,与同样处理的丙酮酸标准液进行比色,计算出其含量,以此测定转氨酶的活性.

丙酮酸 + 2,4–二硝基苯肼 丙酮酸–2,4–二硝基苯腙(棕红色)

本实验用金氏(King)法(1)测定转氨酶的活性单位为:每毫升血清与基质在37℃下作用60分钟,生成1μmol丙酮酸为1个单位.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.1/15 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲溶液:

甲液:1/15 mol/L磷酸氢二钠溶液:称取磷酸氢二钠(Na2HPO4)9.47g(或Na2HPO4 · 12H2O 23.87g)溶解于蒸馏水中,定容至1 000 ml.

乙液:1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液:称取磷酸二氢钾(KH2PO4)9.078g,溶解于蒸馏水中,定容至1 000 ml.

取甲液825 ml乙液175 ml混合,测其pH为7.4即1/15 mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液.

2.GPT基质液:精确称取a–酮戊二酸29.2 mg及DL–丙氨酸1.78g,溶于1/15 mol/L pH 7.4的磷酸盐缓冲液50ml 中溶解,加1mol/L NaOH溶液0.5ml,校正pH至7.4.再以pH 7.4的磷酸缓冲液定容至100ml,充分混合,冰冻贮存.

3.2,4–二硝基苯肼溶液:精确称取2,4–二硝基苯肼20mg,先溶解于10ml浓盐酸中(可加热助溶),再以蒸馏水稀释至100ml(有沉渣可过滤),棕色瓶内保存.(注意:此溶液配制时释放大量的热和难闻气味配制时应戴上口罩)

4.丙酮酸标准液(1ml = 2μmol丙酮酸即2mmol/L):精确称取丙酮酸钠22mg于100ml容量瓶中,用1/15 mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲溶液稀释至刻度.此溶液应新鲜配制,不能存放.

5.0.4 mol/L氢氧化钠溶液:称取16g氢氧化钠溶解于蒸馏水中,定容至1 000ml.

6.1mol/L氢氧化钠溶液:称取4g氢氧化钠溶解于蒸馏水中,定容至1 00ml.

7.血清300ml.

二 器材

1.水浴锅.

2.分光光度计.

【 操 作 】

1.标准曲线制作:取6支试管按下表操作.

试管号

试 剂

1 2 3 4 5 6

丙酮酸标准液 (ml)

GPT基质液 (ml)

PH7.4磷酸缓冲液(ml)

0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25

0.5 0.45 0.4 0.35 0.3 0.25

0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1

水浴37℃,10分钟

2,4二硝基苯肼溶液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5

保温37℃,20分钟

0.4N氢氧化钠溶液 (ml) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

相当活性(单位数) 空白 100 200 300 400 500

混匀后,用分光光度计在520nm波长处进行比色测定,以空白调零,读取各管吸光度读数.以各管相应的转氨酶活性单位值为横坐标,吸光度值为纵坐标,用坐标纸绘制标准曲线.

2.GPT测定:取2支洁净的试管按下表操作.

试 剂 空 白 测 定

血 清 (ml) 0.1 0.1

G PT基质液 (ml) -- 0.5

混匀, 37℃水浴,60分钟

G PT基质液 (ml) 0.5 --

2,4二硝基苯肼溶液 (ml) 0.5 0.5

混匀, 37℃水浴,20分钟

0.4mol/L氢氧化钠 (ml) 5.0 5.0

混匀,放置5分钟,用分光光度计在波长520nm波长处进行比色测定,以空白调零,读取测定管吸光度值.

【 实验结果 】

所测得的吸光度值在已绘制好的标准曲线上直接查对,即可得知待测转氨酶的活性单位.

【 注意事项 】

1.测定血清中转氨酶活性主要有金氏 (King) 法,赖氏 (Reitman—Frankel)法和改良穆氏(Mohun)法.这三种方法的原理,试剂和操作方法包括血清和试剂的用量及作用温度均相同,不同之处是金氏法酶作用时间为60分钟,而其他二法为30分钟.因此活性单位定义不同.

2.转氨酶只作用于L–型氨基酸,对D–型氨基酸无催化能力.实验中所用的是DL–型的混旋氨基酸.若采用L–型时,则用量比DL–型少一半.

3.所用仪器应清洁,不应含有酸,碱,Zn2+,Ca2+,Hg2+,Ag+等蛋白沉淀剂.

4.血清不应溶血,因血细胞内转氨酶含量较多.样品采集后应当日进行测定,否则应将血清分离后贮存于冰箱.

5.温度及时间一定要严格控制,准确掌握.pH要准确以免影响酶活性.

实验二 过氧化氢酶及过氧化物酶的作用

【 原 理 】

在生物机体内,某些代谢物由于需氧脱氢的结果而产生对机体有害的过氧化氢.体内的过氧化氢酶能催化过氧化氢分解成水和分子氧,使过氧化氢不致在体内积累.因此,过氧化氢酶具有保护生物机体的作用.

过氧化氢酶是一种以铁卟啉为辅基的酶,它广泛存在于动植物组织中.

过氧化物酶也是一种以铁卟啉为辅基的酶,它能催化过氧化氢释放出新生态氧以氧化某些酚类和胺类物质,例如,氧化溶于水中的焦性没食子酸生成不溶于水的焦性没食子橙(橙红色).其作用机制如下:

E + H2O2 E–H2O2

E–H2O2 + H2O2 E + 2 H2O + O2

【 试剂和器材 】

一 试剂

2%过氧化氢溶液:此溶液易见光分解,应新鲜配制.

1%焦性没食子酸溶液:焦性没食子酸1g,用蒸馏水溶解并配至100ml.此溶液易

氧化,应新鲜配制.

铁粉.

二 材料

鲜猪肝糜.

马铃薯或血液.

白菜梗提取液:白菜梗约5g,切成细块,置研钵内,加蒸馏水15ml研磨成浆,转

移出滤液,备用.

【 操 作 】

1.过氧化氢酶的作用

取试管5支,按下表操作:

试管 2% H2O2(ml) 新鲜肝糜 (g) 煮沸肝糜(g) 生马铃薯(g) 熟马铃薯(g) 铁粉

1 3 0.5 - - - -

2 3 - 0.5 - - -

3 3 - - 1 - -

4 3 - - - 1 -

5 3 - - - - 少许

加毕,观察有无气泡放出,特别是肝糜周围和马铃薯周围.

2.过氧化物酶的作用

取试管4支,按下表操作:

试管 1%焦性没食子酸 2% H2O2 蒸馏水 白菜梗提取液 煮沸的白菜梗提取液

(ml) (滴) (ml) (ml) (ml)

1 2 2 2 - -

2 2 - - 2 -

3 2 2 - 2 -

4 2 2 - - 2

摇匀后,观察并记录各管颜色变化和沉淀的出现.

实验三 琥珀酸脱氢酶及丙二酸的抑制作用

【 原 理 】

琥珀酸脱氢酶是三羧酸循环中的一个重要的酶,测定细胞中有无这种酶可以初步鉴定

三羧酸循环途径是否存在.琥珀酸脱氢酶可使其底物脱氢,产生的氢可通过一系列传递体最后递给氧而生成水.在缺氧的情况下,若有适当的受氢体也可显示出脱氢酶的作用.如心肌中的琥珀酸脱氢酶在缺氧的情况下,可使琥珀酸脱氢生成延胡索酸,脱下之氢可将蓝色的甲烯蓝还原成无色的甲烯白.这样,便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用.

琥珀酸 + 甲烯蓝 琥珀酸脱氢酶 延胡索酸 + 甲烯白

丙二酸的化学结构与琥珀酸相似,它能与琥珀酸竞争而和琥珀酸脱氢酶结合.若琥珀酸脱氢酶已与丙二酸结合,则不能再催化琥珀酸脱氢,这种现象称为竞争性抑制.如相对地增加琥珀酸的浓度,则可减轻丙二酸的抑制作用.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.1.5%琥珀酸钠溶液:取琥珀酸钠1.5g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml.如无琥珀酸钠可用琥珀酸配成水溶液后,以氢氧化钠溶液中和至pH7~8.

2.1%丙二酸钠溶液:取丙二酸钠1g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml.

3.0.02%甲烯蓝溶液.

4.1/15mol/LNa2HPO4溶液:取Na2HPO4 · 2H2O 11.88g,用蒸馏水溶解并稀释至1 000ml.

5.液体石蜡.

二 器材

1.玻璃匀浆器.

2.离心机.

三 材料

新鲜猪心.

【 操 作 】

1.猪心脏制备液:称取新鲜猪心1.5~2.0g玻璃匀浆器放中,加入等体积的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml,捣碎成浆,再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液,放置一小时,不时摇动,离心(3000r/min 10 min)取上清液备用.

2.取4支试管,编号并按下表操作:

试管 心脏制备液 1.5%琥珀酸钠溶液 1%丙二酸钠溶液 蒸馏水 0.02%甲烯蓝溶液

(滴) (滴) (滴) (滴) (滴)

1 5 5 - 10 2

2 5(先煮沸) 5 - 10 2

3 5 5 5 5 2

4 5 10 5 5 2

3.各管溶液混匀后,每管各加液体石蜡一薄层(约5~10滴).为什么

4.各管置于37℃水浴中,半小时内观察各管颜色变化,比较其速度并说明原因.然后将第一管用力摇动,观察其有何变化 为什么

实验四 γ–球蛋白的分离

【 原 理 】

中性盐 (如硫酸铵,硫酸钠,氯化钠,硫酸镁等)对球状蛋白质的溶解度有显著影响.随着中性盐浓度的增加,离子强度也增加.当溶液离子强度增加到一定数值时,溶液中蛋白质的溶解度开始下降.离子强度增加到足够高时,蛋白质可从水溶液中沉淀出来,这种现象叫做盐析.各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的高浓度盐溶液来沉淀分离各种蛋白质.

蛋白质是一种生物大分子,它具有不能通过半透膜的性质.透析就是利用这种性质使之与其它小分子物质如无机盐,单糖等分开.本次实验应用的是脱盐透析,即盐析后,将含大量盐类的蛋白质溶液放在半透膜的袋内,再将透析袋浸入蒸馏水中.经过一段时间,袋内的盐类浓度即逐渐降低.若经常更换袋外的液体,最后即可使袋内的蛋白质溶液中所含的盐类除净,从而达到脱盐的目的.应用不同浓度硫酸铵分段盐析法将血清中γ–球蛋白及α,β球蛋白分离,最后用透析法脱盐,即可得到纯度较高的γ–球蛋白.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.pH 7.2,0.01mol/L磷酸盐缓冲液生理盐水(简称PBS): 取0.2mol/L Na2HPO4溶液36.0ml,0.2mol /L NaH2PO4溶液14.0ml混合,加NaCl 8.5克,用蒸馏水稀释至1 000ml.

2.pH7.2饱和硫酸铵溶液:用浓氨水将2 000ml饱和硫酸铵溶液调pH到7.2.

3.纳氏试剂:

纳氏试剂贮存液:于500ml三角烧瓶内加入碘化钾150克,碘110克,汞50克及蒸馏水l00ml,用力振荡7~15分钟,至碘色将转变时,此混合液即产生高热.随即将此烧瓶浸于冷水内振荡,直至棕色之碘转变成带绿色之碘化钾汞溶液为止.将上清液倾入2 000ml量筒内,并用蒸馏水洗涤瓶内沉淀物数次.将洗涤液一并倾入量筒内,加蒸馏水至2 000ml刻度后,混匀即成.

纳氏试剂应用液:取10%氢氧化钠700ml,钠氏试剂贮存液150ml及蒸馏水150ml混匀即成,如显混浊,可静置数日后取上清液使用.此试剂之酸碱度极为重要.用lmol/L盐酸溶液20ml滴定时,需此试剂11～11.5ml恰好使酚酞指示剂变成红色时最为适宜.否则必须纠正其酸碱度.

4.双缩脲试剂:溶解1.50克硫酸铜(CuSO4·5H2O)和6.0克酒石酸钾钠(NaKC4H406 · 4H20)于500ml蒸馏水中.在搅拌下加入10%氢氧化钠溶液300ml,用蒸馏水稀释到1升,贮存在内壁涂以石蜡的瓶中,可长期保存.

5.浓蔗糖液:蔗糖的饱和溶液.

6.10%氢氧化钠:取10克氢氧化钠溶解于蒸馏水中,定容至100ml.

二 器材

1.透析袋.

2.磁力搅拌器.

3.离心机.

三 材料

兔血清

【 操 作 】

一 盐析

1.取离心管1支加入血清2ml,再加入等量PBS稀释血清,摇匀后,逐渐加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2ml(相当于33%饱和度硫酸铵),边加边摇.然后静止半小时,再离心(3 000r/min)20分钟,倾去上清液(主要含白蛋白).

2.用lml PBS将离心管底部的沉淀搅拌溶解,再逐滴加饱和硫酸铵溶液0.5m1.摇匀后放置半小时,离心(3 000r/min)20分钟,倾去上清液(主要含α,β球蛋白),其沉淀即为初步纯化的γ–球蛋白.如要得到更纯的γ–球蛋白,可重复盐析过程1～2 次.

3.把提取的γ–球蛋白用1 mlPBS悬浮.

二 透析脱盐与浓缩

1.将盐析得到的γ–球蛋白放入透析袋内,用线绳缚紧上口,用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100ml烧杯中,使透析袋下半部浸入水中.

2.将烧杯放在磁力搅拌器上搅拌1小时以上(中间换水1～2次),然后将透析袋取下.小心将线绳解开,吸取袋内的液体,与烧怀中的水同时用双缩脲试剂检查袋内外的蛋白质,用纳氏试剂检查袋内外液体中的铵离子(NH4+),观察透析法的脱盐效果.

3.脱盐后得到的γ–球蛋白溶液可继续浓缩,即用透析袋装好悬于盛有10ml浓蔗糖或聚乙二醇溶液的小烧杯内1小时以上,观察袋内液体体积的变化.

实验五 γ–球蛋白含量测定(光度分析法)

【 原 理 】

双缩脲法是蛋白质光度分析法的一种,是利用蛋白质的双缩脲反应而测定蛋白质含量的方法.因蛋白质含有两个以上的肽键,所以有双缩脲反应.在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫红色络合物,其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比,而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关.在一定的实验条件下,未知样品溶液与标准蛋白质溶液同时反应,并于540~560nm测定,即可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度.

【 试剂和器材 】

一 试剂

1.标准酪蛋白溶液(5mg/ml):用0.05mol/L NaOH溶液配制:5g酪蛋白加0.05mol/L NaOH溶液至1 000ml.

2.双缩脲试剂:溶解1.5g硫酸铜(CuSO4 · 5H2O)和6.0 g酒石酸钾钠(NaKC4H4O6 · 4H2O)于500ml蒸馏水中.在搅拌下加入10% NaOH溶液300ml,用蒸馏水稀释到1升,贮存在内壁涂有石蜡的瓶中,可长期保存.

3.未知蛋白质溶液:γ–球蛋白溶液.

二 器材

分光光度计.

【 操 作 】

1.标准曲线的绘制:取6支试管按下表操作.

试 剂 1 2 3 4 5 6

标准酪蛋白溶液(ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 2.0

蒸馏水 (ml) 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0

双缩脲试剂 (ml) 4 4 4 4 4 4

室温下(15~25℃)放置30分钟,用分光光度计于540nm测定.以光密度为纵坐标,酪蛋白含量为横坐标用坐标纸绘制标准曲线.

2.γ–球蛋白溶液浓度的测定:取3支试管按下表操作.

试 剂 空白管 测定1 测定2

γ–球蛋白溶液(ml) - 1 1

蒸馏水 (ml) 2 1 1

双缩脲试剂 (ml) 4 4 4

摇匀,放置30分钟,540nm测定读取光密度.

【 实验结果 】

求出待测蛋白质溶液的光密度后,从标准曲线上查出其蛋白质浓度,按稀释倍数求出每毫升蛋白质溶液的蛋白质含量.

实验六 凝胶柱层析法(γ–球蛋白纯化)

【 原 理 】

凝胶层析(gel chromatography),又称为凝胶过滤(gel filtration),分子筛过滤(molecular sieve filtration),凝胶渗透层析(gel osmotic chromatography)等.它是20世纪60年代发展起来的一种层析技术.其基本原理是利用被分离物质分子大小不同及固定相(凝胶)具有分子筛的特点,将被分离物质各成分按分子大小分开,达到分离的方法.

凝胶是由胶体粒子构成的立体网状结构.网眼里吸满水后凝胶膨胀呈柔软而富于弹性的半固体状态.人工合成的凝胶网眼较均匀地分布在凝胶颗粒上有如筛眼,小于筛眼的物质分子均可通过,大于筛眼的物质分子则不能,故称为"分子筛".凝胶之所以能将不同分子的物质分开是因为当被分离物质的各成分通过凝胶时,小于筛眼的分子将完全渗入凝胶网眼,并随着流动相的移动沿凝胶网眼孔道移动,从一个颗粒的网眼流出,又进入另一颗粒的网眼,如此连续下去,直到流过整个凝胶柱为止,因而流程长,阻力大,流速慢;大于筛眼的分子则完全被筛眼排阻而不能进入凝胶网眼,只能随流动相沿凝胶颗粒的间隙流动,其流程短,阻力小,流速快,比小分子先流出层析柱;小分子最后流出.分子大小介于完全排阻不能进入或完全渗入凝胶筛眼之间的物质分子,则居中流出.这样被分离物质即被按分子的大小分开.

用于凝胶层析的凝胶均为人工合成的产品,主要有交联葡聚糖(商品名为Sephadex),琼脂糖(商品名为Sepharose),聚丙烯酰胺凝胶(商品名为Bio–gel)及具有一定网眼的细玻璃珠等和这些

四、丙氨酸氨基转移酶

肝细胞严重损伤，大量的谷丙转氨酶释放到血液中，使血清中的谷丙转氨酶升高。人体内除肝脏外，还有多个器官和组织中存在谷丙转氨酶，凡是存在这种酶的组织器官发生病变，都可使血清转氨酶升高。某些生理情况也可使转氨酶一时性升高，如饱餐、过于劳累之后。

根据作用的氨基酸和酮酸不同，可将转氨酶分为数十种，其中以谷氨酸丙酮酸转氨酶（简称谷丙转氨酶――GPT，ALT）和谷氨酸草酰乙酸转氨酶（简称谷草转氨酶――GOT，AST）最为主要。在肝内，GPT主要分布于细胞浆水溶性部分，GOT则分布于细胞浆水溶部分和线粒体中。

在肝脏等脏器组织损伤或坏死时，细胞内酶释入血流，引起血清酶活力升高。由于整个肝脏内转氨酶活力比血清内该酶总活力高1000～1000倍，只要有1％肝细胞坏死便可使血清酶活力升高1倍（假设所有释出的酶均保持活性）。因此，在除外肝外脏器病变的情况下（如急性心肌梗塞、心肌炎和肌病），血清内转氨酶升高，在一定程度上即反映了肝细胞损害和坏死的程度。又由于肝内GPT活性超过体内其他任何脏器内的该酶活性，故测定GPT比GOT对反映肝脏损害更具特异性。

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即谷丙转氨酶

引起谷丙转氨酶升高的原因很多，当然妊娠期，亦可出现一过性转氨酶升高。但仅仅根据你所说的情况无法准确诊断。

因为ALT即谷丙转氨酶，主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中。肝细胞或某些组织损伤或坏死，都会使血液中的谷丙转氨酶升高，临床上有很多疾病可引起转氨酶异常，必须加以鉴别——

1、病毒性肝炎这是引起转氨酶增高最常见的疾病，各类急、慢性病毒性肝炎均可导致转氨酶升高。

2、中毒性肝炎多种药物和化学制剂都能引起转氨酶升高，但停药后，转氨酶可恢复正常。

3、大量或长期饮酒者谷丙转氨酶也会升高。

4、肝硬化与肝癌肝硬

化活动时，转氨酶都高于正常水平，应该积极治疗。5、胆道疾病胆囊炎、胆石症急性发作时，常有发热、腹痛、恶心、呕吐、黄疸、血胆红素及转氨酶升高。

6、心脏疾病急性心肌梗塞、心肌炎、心力衰竭时，谷丙转氨酶和谷草转氨酶均升高，患者常有胸痛、心悸、气短、浮肿。心脏检查有阳性体征及心电图异常。

7、其他某些感染性疾病，如肺炎、伤寒、结核病、传染性单核细胞增多症等，都有转氨酶升高的现象，但这些疾病各有典型的临床表现，并可借助实验室检查，明确诊断。此外，急性软组织损伤、剧烈运动、

回答者：水云深浪 - 进士出身 八级 1-2 19:36

病毒性肝炎检测指标谷丙转氨酶（或称S-GPT、ALT）增高，既可标志急性肝炎发病，又可反映慢性肝炎活动、迁延。因为“GPT”主要存在于细胞中，肝脏只要有1%肝细胞变性坏死，就可使血清内GPT活性增高一倍。急性肝炎时，由于肝细胞炎性肿胀，细胞膜通透性增强而使转氨酶大量流入血液导致GPT急剧增高；慢性肝炎则由肝细胞变性、坏死产生缺陷而致GPT过多地渗入血液。中医根据肝炎GPT增高时的症状、体征，一般都有面色黧黑、纳差口苦、神疲肢倦、胁痛脘胀、小便吁黄赤、大便不爽、舌苔黄腻或瘀滞。属于湿热疫毒壅结，肝脾气滞血瘀等病理表现，病情偏热、偏毒、偏湿、偏瘀。根据热、毒、湿、瘀不同侧重进行辨证施治

说明你肝功能已经有了损害,本来就是小三阳患者,如果这时候的肝功能不正常,就说明情况不稳定,易传染性增强,疾病开始趋于不良状态,需要及时进行降酶治疗,促使肝功能的恢复

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